GenMute™ siRNA Transfection Reagent 產(chǎn)品型號(hào)：SL100568

GenMute試劑是一種新型可生物降解的非脂質(zhì)體siRNA/miRNA & DNA遞送工具。用我們專(zhuān)有的pH依賴(lài)性構(gòu)象變化(PDCC)技術(shù)中，可生物降解的轉(zhuǎn)染劑是通過(guò)向其側(cè)鏈添加預(yù)先篩選的疏水基團(tuán)來(lái)配制的GenMute試劑是功能多樣且強(qiáng)大的基因傳遞工具。GenMute試劑已經(jīng)被證實(shí)能有效地和可重復(fù)地轉(zhuǎn)染單個(gè)siRNA/miRNA或共轉(zhuǎn)染DNA/siRNA或DNA/miRNA到多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

大小和內(nèi)容:
- GenMute試劑，1.0 mL，足以在24孔板中轉(zhuǎn)染5.0 pmol siRNA或miRNA模擬物進(jìn)行約2000次反應(yīng)。
- GenMute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x)，用于最大轉(zhuǎn)染效率，8.0 mL制成40 mL工作溶液。

應(yīng)用:
-對(duì)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的單siRNA轉(zhuǎn)染或DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染。
-單一miRNA、miRNA模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染或DNA/miRNA或DNA/miRNA模擬物共轉(zhuǎn)染至多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

存儲(chǔ):
在4°C下儲(chǔ)存GenMute 試劑和RT用于GenMute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x)。如果儲(chǔ)存得當(dāng)，該產(chǎn)品可穩(wěn)定儲(chǔ)存12個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。

優(yōu)勢(shì):
-僅用1.0 nM siRNA / miRNA模擬物，在低濃度下具有優(yōu)異的沉默效果
-最小化細(xì)胞中的非特異性和脫靶效應(yīng)
-單管反應(yīng)
-適合廣泛的哺乳動(dòng)物細(xì)胞
-極低的細(xì)胞毒性
-非常實(shí)惠

GenMute siRNA & DNA轉(zhuǎn)染劑與品牌產(chǎn)品的沉默效果比較

GenMute轉(zhuǎn)染劑(上圖)與dharma fect 4 siRNA轉(zhuǎn)染劑(中圖)的敲除功效比較以及HEK293細(xì)胞上的Lipofectamine 2000(下圖)。按照制造商的方案，通過(guò)上述三種轉(zhuǎn)染試劑，將靶向0.5-20nm不同終濃度的海腎螢光素酶的siRNA與海腎螢光素酶基因(每孔0.5g pRL-CMV DNA)共轉(zhuǎn)染到生長(zhǎng)在24孔板中的HEK293細(xì)胞中。 用海腎螢光素酶測(cè)定系統(tǒng)(Promega)在共轉(zhuǎn)染后24小時(shí)測(cè)定海腎螢光素酶活性。用光度計(jì)(Beckman Coulter LD 400)在10s積分期間從5.0 l裂解物測(cè)量發(fā)光。熒光素酶活性為 表示為10s內(nèi)積分的光單位(RLU ),并通過(guò)使用BCA分析標(biāo)準(zhǔn)化為每毫克細(xì)胞蛋白。誤差條代表從三次實(shí)驗(yàn)中得出的標(biāo)準(zhǔn)偏差。相對(duì)于未處理的細(xì)胞計(jì)算熒光素酶沉默效率。在…期間 GenMute和dharma fect 4試劑使1.0 nM的海腎熒光素酶siRNA李產(chǎn)生顯著的基因沉默pofectamine 2000僅在30納米后產(chǎn)生良好的敲除(數(shù)據(jù)未顯示)。


在HEK293細(xì)胞中用0.5升GenMu對(duì)內(nèi)源性表達(dá)的KIF11(也稱(chēng)為Eg5)進(jìn)行出色的沉默24孔板的每個(gè)孔中含有te試劑和5.0 pmol Eg5 siRNA。 KIF11(也稱(chēng)為Eg5)編碼 一種運(yùn)動(dòng)蛋白，屬于 驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白家族參與細(xì)胞有絲分裂期間染色體定位和雙極紡錘體形成。KIF11水平的降低導(dǎo)致有絲分裂停滯。與陰性對(duì)照(最終10 nM)相比，GenMute試劑以每孔僅0.5 l的量有效地將Eg5 siRNA(最終10 nM，右圖)遞送至HEK293細(xì)胞。左側(cè)面板)。與陰性對(duì)照(左圖)相比，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)(右圖)用尼康顯微鏡觀(guān)察到“聚集"293細(xì)胞的表型。


GenMute轉(zhuǎn)染試劑敲低了Hela細(xì)胞中內(nèi)源性層粘連蛋白A/C基因的表達(dá)。 通過(guò)以下方式將靶向核纖層蛋白A/C基因的siRNA(右圖)和假siRNA(左圖)導(dǎo)入Hela細(xì)胞(最終1.0 nM) GenMute轉(zhuǎn)染試劑。L通過(guò)免疫熒光在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)監(jiān)測(cè)amin A/C基因沉默。用小鼠單克隆核纖層蛋白A/C特異性抗體探測(cè)核纖層蛋白A/C，然后加入FITC綴合的抗小鼠抗體。定量分析表明由GenMute轉(zhuǎn)染試劑遞送的1.0 nM的核纖層蛋白siRNA敲除了Hela細(xì)胞中94%的內(nèi)源性表達(dá)的核纖層蛋白A/C。

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