簡要描述:葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
GOD(EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產(chǎn)生H2O2,是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理
GOD催化產(chǎn)生H2O2,過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在500 nm有特征吸收峰,顏色深淺與GOD活性成線性關(guān)系。
試驗中所需的儀器和設(shè)備
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
緩沖液:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;
樣品測定的準(zhǔn)備
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至500nm,蒸餾水調(diào)零。
試劑一和試劑二的配制:參見試劑的組成和配制。
3、煮沸樣本的準(zhǔn)備:取200μL樣本至新的EP管中,95℃水浴10min,冷卻至室溫后,8000g 4℃離心10min,取上清作為對照管的煮沸樣本待測。
4、測定操作表
試劑(μL) | 對照管 | 測定管 |
樣本 | 50 | |
煮沸樣本 | 50 | |
試劑一 | 75 | 75 |
試劑二 | 75 | 75 |
混勻,35'C保溫15min后,于500nm波長處讀取吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。
GOD活力單位的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169;x為H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為ΔA。
1、血清(漿)GOD活力的計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織GOD活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位定義:每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169;x為H2O2標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為ΔA。
1、血清(漿)GOD活力的計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷V樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織GOD活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=118×(ΔA+0.0169)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位定義:每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.235×(ΔA+0.0169)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
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