肝脂酶（HL）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

肝酯酶是脂肪分解酶，在肝實質(zhì)細胞中合成，存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細胞表面和竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面，可促進脂蛋白中的膽固醇向類固醇激素轉化，血漿中的HL活性增高時，血漿中小顆粒可導致LDL水平升高，加速動脈粥樣硬化的發(fā)生。

測定原理

肝酯酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚，可與固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝酯酶活性成正相關。

自備實驗用品及儀器

天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。

試劑組成和配制    

試劑一：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體8mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心10min，取上清待測。

3. 血清：直接測定。

測定操作

計算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.1519 x -0.1241，R2=0.9994

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 6.58×（△A+0.1241）÷W

3．按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T

                                      = 6.58×（△A+0.1241）÷細胞數(shù)量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.1519×V反總÷V樣÷T

                                = 6.58×（△A+0.1241）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，10min

b．用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y= 0.076 x -0.1241，R2=0.9994

1．按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/mg prot）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/g 鮮重）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 13.16×（△A+0.1241）÷W

3．按照細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。

HL活性（μmol /min/104 cell）= （△A+0.1241）÷0.076×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T

                                      = 13.16×（△A+0.1241）÷細胞數(shù)量

4．按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmol α-萘酚為一個酶活力單位。HL活性（μmol /min/mL）=（△A+0.1241）÷0.076×V反總÷V樣÷T

                                = 13.16×（△A+0.1241）

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，10min

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡建設，提高公司內(nèi)部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

肝脂酶（HL）測試盒