乳酸含量（LA）測(cè)試盒

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類(lèi)代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制 

提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體2mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入0.6mL蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加6mL蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃保存。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有4個(gè)棕色空瓶）

樣本處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測(cè)定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；于4℃，12000g離心10min，取上清測(cè)定。

3. 血清：直接測(cè)定。              

測(cè)定操作

注意：標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管和標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管只需測(cè)定一次，每個(gè)樣品測(cè)定管設(shè)一個(gè)樣品對(duì)照管

計(jì)算公式

1. 按照蛋白含量計(jì)算

LA含量（μmol/mg prot）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ Cpr

                      = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

LA含量（μmol/g 鮮重）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ W

                      = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

LA含量（μmol/104 cell）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

                      = 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

LA含量（μmol/mL）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)

                   = 2×△A樣÷△A標(biāo)

C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)

若吸光值超過(guò)2，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

*低檢出限為1.8μmol/L。

上海牧榮生物科技有限公司

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