中性蛋白酶測試盒

測定意義

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機(jī)態(tài)磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。

測定原理

用弱堿性提取堿溶性磷和吸附態(tài)磷，用鉬銻抗比色法測定。

自備實驗用品及儀器

天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。

試劑組成和配制

提取液：液體105mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體6mL×1支，4℃保存。

試劑二： 粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。

試劑三： 粉劑×3支，4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解。現(xiàn)配現(xiàn)用。

樣本處理

新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：20的比例（建議稱取約0.05g土樣，加入1mL提取液），振蕩提取1h，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。

測定步驟

1. 取試劑三一支，加入1mL蒸餾水充分溶解待用。

2. 顯色液的配制（可測50個樣）：取EP管一支，加入660μL試劑一，再加入100μL試劑二，充分混勻后，再加入240μL試劑三，充分混勻待用；配好的顯色液應(yīng)為黃色，若變藍(lán)則為磷污染；顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用；若一次性測不了50個樣，可按比例縮小各試劑體積。

3. 操作表

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1164x-0.012，R2 = 0.9958，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.012）÷ 0.1164×V樣÷（W×V樣÷V樣總）

= 8.591×（△A+0.012）÷W

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，約0.05g

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0582x-0.012，R2 = 0.9958，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.012）÷ 0.0582×V樣÷（W×V樣÷V樣總）

= 17.182×（△A+0.012）÷W

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.04mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，約0.05g

注意事項

1. 配好的顯色液當(dāng)天用完，變藍(lán)則不能使用。

2. *低檢出限為0.2μg/mL。

3. 
   

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