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mediomics:Bridge-It PDE檢測試劑盒

簡要描述:mediomics:Bridge-It PDE檢測試劑盒
96 孔板, Bridge-It 檢測, cAMP , cAMP-PDE ,細胞間信號傳導,細胞內(nèi)信號傳導,蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用.
(Bridge-It PDE、cAMP-PDE、PDE 96 孔板、PDE 檢測試劑盒、PDE Mediomics、磷酸二酯酶)

  • 產(chǎn)品型號:PD1016
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2023-12-20
  • 訪  問  量:536

詳細介紹

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應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合

mediomics:Bridge-It PDE檢測試劑盒:Bridge-It® cAMP-磷酸二酯酶 (PDE) 檢測試劑盒,96 孔格式 

Bridge-It® cAMP 磷酸二酯酶 (PDE) 測定是一種基于熒光的高通量篩選 (HTS) 方法,用于測量純化來源的環(huán)核苷酸磷酸二酯酶活性并確定其抑制劑的 IC 50。該測定基于 Bridge-It® cAMP 多合一熒光測定(Mediomics,目錄號 122938)的形式。

應(yīng)用:

  • PDE相關(guān)藥物發(fā)現(xiàn)項目

  • 心、肺(即COPD)、血小板功能和炎癥機制的研究

  • 焦慮癥或神經(jīng)退行性疾病的研究

 

特征:

  • 簡單: 將測試樣品或標準品與測定溶液混合并在 ~25°C 下孵育

  • 快速: 孵育 30 分鐘后讀取熒光信號

  • 靈活: 檢測方法適用于低通量和高通量篩選形式

cAMP、PDE 和 Bridge-It 熒光測定的背景信息

3',5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP)

3',5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP) 是重要的第二信使,參與多種生物過程的調(diào)節(jié)。 cAMP 的測量在新藥發(fā)現(xiàn)中尤其重要,因為 cAMP 水平與新藥發(fā)現(xiàn)的主要靶標之一——G 蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR) 的活性密切相關(guān)。用于測定 cAMP 濃度的 Mediomics 熒光 cAMP 測定方法基于上述測定平臺設(shè)計。 CAP 是一種細菌 DNA 結(jié)合蛋白,其 DNA 結(jié)合活性取決于 cAMP 的存在,被用作測量 cAMP 水平的高度特異性生物傳感器。當 PDE 將 cAMP 水解為 AMP 時,cAMP 濃度降低,從而導致 CAP-DNA 復(fù)合物形成減少,并與探針形成更多游離“半位點"雙鏈體(未猝滅)。熒光信號的增加與 PDE 活性成正比。

 

Bridge-It® PDE 檢測 – cAMP 標準曲線

以下 cAMP 標準曲線代表使用 Bridge-It® PDE 測定法制備的曲線。它顯示了在 384 孔板中的緩沖液 B 中制備的標準曲線,并在添加 2X 檢測溶液 30 分鐘、1 小時和 2 小時后讀取熒光信號。

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Bridge-It® PDE 檢測 – PDE 活性檢測

以下 PDE 活性測定是使用 Bridge-It® PDE 測定制備的代表性測定。相對活性是在含有指示量的牛腦 PDE 的樣品中測量的(Sigma,St. Louis,MO,目錄號 P9529)。將反應(yīng)在室溫下溫育30分鐘并通過添加0.5ul終止溶液來終止。添加 2X 測定溶液,并在室溫下孵育 40 分鐘后讀取信號。

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Bridge-It® PDE 測定 – IC 50測定

以下測定是使用 Bridge-It® PDE 測定制備的代表性測定。使用來自牛腦的 0.8 mU PDE(Sigma,St. Louis,MO,Cat# P9529)和一定量的 IBMX(Sigma,St. Louis,MO)測量樣品的相對活性。

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注意:RA(相對活性)的定義位于協(xié)議第 8 頁。 PDE 測定在標準 384 孔板中進行,最終 10 ul 反應(yīng)液含有 1 x PDE 反應(yīng)緩沖液(25 mM Tris,pH 7.4,100 mM NaCl,BSA 0.1 mg/ml,CaCl2 0.03 mM,鈣調(diào)蛋白(Sigma, St. Louis, MO, Cat# P1431) 10 U/ml),含有來自牛腦的 0.8 mU PDE (Sigma, St. Louis, MO, Cat# P9529) 和一定量的 IBMX (Sigma, St. Louis, MO) )。將酶和 IBMX 混合并在室溫下預(yù)溫育 5 分鐘。添加6 pmole cAMP,并將反應(yīng)在室溫下溫育30分鐘,并通過添加0.5ul終止溶液來終止。添加 2X 測定溶液,并在室溫下孵育 40 分鐘后讀取信號。

 

研究用途: 僅供研究使用,不可用于診斷程序。

mediomics:Bridge-It PDE檢測試劑盒

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