Aobious 免疫測(cè)定試劑盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA試劑盒

1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶ELISA試劑盒
目錄號(hào):E0269h

范圍:0.156-10納克/毫升

預(yù)期用途

該免疫測(cè)定試劑盒允許體外定量測(cè)定人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸磷酸二酯酶γ-1、血清、血漿、尿液、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液以及其他生物流體中的濃度。


測(cè)試原理

該試劑盒中提供的微量滴定板已經(jīng)預(yù)先包被了特異性針對(duì)1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1的抗體。然后將標(biāo)準(zhǔn)品或樣品加入適當(dāng)?shù)奈⒘康味ò蹇字?，將?duì)1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1特異的生物素偶聯(lián)的多克隆抗體制劑和與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的抗生物素蛋白加入每個(gè)微量滴定板孔中并孵育。然后向每個(gè)孔中加入TMB底物溶液。只有那些含有1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1、生物素偶聯(lián)的抗體和酶偶聯(lián)的抗生物素蛋白的孔會(huì)顯示顏色變化。通過(guò)加入硫酸溶液終止酶-底物反應(yīng)，并用分光光度計(jì)在450nm±2nm的波長(zhǎng)下測(cè)量顏色變化。然后通過(guò)將樣品的外徑與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較來(lái)確定樣品中的濃度。

材料和部件

試劑數(shù)量

檢測(cè)板1

標(biāo)準(zhǔn)2

樣本稀釋液1×20毫升

檢測(cè)稀釋劑A 1×10毫升

檢測(cè)稀釋劑B 1×10毫升

檢測(cè)試劑A 1 × 120μl

檢測(cè)試劑B 1 × 120μl

洗滌緩沖液(25倍濃縮液)1×30毫升

底物1×10毫升

停止溶液1×10毫升

用于96孔的平板密封器5

說(shuō)明1


所需的其他用品

酶標(biāo)儀

移液器和移液器吸頭

EP管

去離子水或蒸餾水


工具包的儲(chǔ)存

檢測(cè)板、標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)試劑A和檢測(cè)試劑B收到后應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃下。收到試劑盒后，底物應(yīng)始終保存在4℃下。其他試劑根據(jù)小瓶上的標(biāo)簽保存。但是為了長(zhǎng)期保存，請(qǐng)將整個(gè)試劑盒保存在-20℃下。未使用的條帶應(yīng)保存在密封袋中，并提供干燥劑，以盡量減少暴露在潮濕空氣中。檢測(cè)試劑盒可在試劑盒的有效期內(nèi)使用(自生產(chǎn)日期起六個(gè)月)。如果按照上述規(guī)定儲(chǔ)存，打開(kāi)的檢測(cè)試劑盒將保持穩(wěn)定，直到所示的失效日期。


樣本收集和儲(chǔ)存

血清-使用血清分離管(SST ),使樣品凝結(jié)30分鐘，然后以大約1000 × g的速度離心15分鐘。取出血清并立即進(jìn)行分析，或者等分并在-20℃或-80℃下儲(chǔ)存樣品。

血漿-使用EDTA或肝素作為抗凝劑收集血漿。在采集的30分鐘內(nèi)，將樣品在2℃ - 8℃下以1000 × g離心15分鐘。將樣品儲(chǔ)存在-20℃或-80℃下。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

尿液——無(wú)菌收集當(dāng)天的第一次尿液(中段),直接排入無(wú)菌容器。離心去除顆粒物質(zhì)，立即化驗(yàn)或等分并儲(chǔ)存在≤ -20℃下。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

組織勻漿——組織勻漿的制備取決于組織類(lèi)型。對(duì)于該分析，用1X PBS沖洗組織以去除多余的血液，在20mL 1X PBS中勻漿，并在≤ -20℃下儲(chǔ)存過(guò)夜。在進(jìn)行兩次凍融循環(huán)以破壞細(xì)胞膜后，將勻漿以5000 x g離心5分鐘。去除上清液并立即進(jìn)行分析，或者等分并在≤ -20℃下儲(chǔ)存。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他生物液體——通過(guò)離心去除顆粒，并立即進(jìn)行分析，或在-20℃或-80℃下等分并儲(chǔ)存樣品。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

注意:

5天內(nèi)使用的樣品可儲(chǔ)存在2-8℃下，否則樣品必須儲(chǔ)存在-20℃ (1個(gè)月)或-80℃ (2個(gè)月)，以避免生物活性損失和污染。
由于某些化學(xué)物質(zhì)的影響，由化學(xué)裂解緩沖液制備的組織或細(xì)胞提取樣本可能會(huì)導(dǎo)致意外的ELISA結(jié)果。
受包括細(xì)胞生存力、細(xì)胞數(shù)量以及取樣時(shí)間等因素的影響，試劑盒可能無(wú)法檢測(cè)到來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)上清液的樣品
樣本溶血會(huì)影響結(jié)果，因此不能檢測(cè)溶血標(biāo)本。
進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將樣品緩慢置于室溫。
不要使用熱處理過(guò)的樣品。

程序的局限性

AOBIOUS僅對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，但不對(duì)檢測(cè)過(guò)程中消耗的樣品負(fù)責(zé)。用戶(hù)應(yīng)計(jì)算整個(gè)測(cè)試中可能使用的樣本量。請(qǐng)?zhí)崆邦A(yù)留足夠的樣品。
試劑盒不得在超過(guò)試劑盒標(biāo)簽上的有效期后使用。
請(qǐng)勿將其他批次或來(lái)源的試劑混合或替換。
如果樣本生成的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，用樣本稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣本，然后重復(fù)檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑、操作員、移液技術(shù)、清洗技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒年限的任何變化都會(huì)導(dǎo)致結(jié)合的變化。

試劑制備

洗滌緩沖液-如果濃縮物中有晶體形成，加熱至室溫并輕輕混合，直到晶體溶解。將30毫升洗滌緩沖液濃縮物稀釋到去離子或蒸餾水中，以制備750毫升洗滌緩沖液。
標(biāo)準(zhǔn)品-用1.0毫升樣品稀釋液重新配制標(biāo)準(zhǔn)品。這種復(fù)溶產(chǎn)生200 ng/mL的儲(chǔ)備溶液。在進(jìn)行系列稀釋之前，讓標(biāo)準(zhǔn)品靜置至少15分鐘，并輕輕攪動(dòng)(不允許直接在孔中進(jìn)行系列稀釋)。未稀釋的標(biāo)準(zhǔn)作為高標(biāo)準(zhǔn)(200 ng/mL)。樣本稀釋劑用作零標(biāo)準(zhǔn)(0 ng/mL)。

納克/毫升200±100。50.0 25.0 12.5 6.25 3.12 0

檢測(cè)試劑A和B -分別使用檢測(cè)稀釋劑A和B (1:100)稀釋至工作濃度。

化驗(yàn)程序

讓所有試劑達(dá)到室溫(請(qǐng)勿直接在37℃溶解試劑)。移液前，應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)，混合所有試劑。避免起泡。為一次實(shí)驗(yàn)保留適當(dāng)數(shù)量的試紙條，并從微量滴定板上移除多余的試紙條。取出的試紙條應(yīng)重新密封，并儲(chǔ)存在4℃下，直至試劑盒到期。按照前面章節(jié)的說(shuō)明準(zhǔn)備所有試劑、工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品。請(qǐng)?jiān)诨?yàn)前預(yù)測(cè)濃度。如果這些值不在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍內(nèi)，用戶(hù)必須為他們的特定實(shí)驗(yàn)確定最佳樣品稀釋度。


每孔添加100 μl標(biāo)準(zhǔn)品、空白或樣品。用板密封器覆蓋。在37℃下孵育2小時(shí)。
清除每個(gè)孔的液體，不要沖洗。向每個(gè)孔中添加100 μl檢測(cè)試劑工作溶液。用板密封器覆蓋。在37℃下孵育1小時(shí)。檢測(cè)試劑A工作溶液可能會(huì)出現(xiàn)渾濁。升溫至室溫，輕輕混合，直到溶液變得均勻。
吸取每個(gè)孔并清洗，重復(fù)該過(guò)程三次，總共清洗三次。使用噴射瓶、多通道移液器、歧管分配器或自動(dòng)清洗器，用清洗緩沖液(約400 μl)填充每個(gè)孔進(jìn)行清洗。在每個(gè)步驟中去除液體對(duì)于良好的性能至關(guān)重要。最后一次清洗后，通過(guò)抽吸或傾析去除任何殘留的清洗緩沖液。將盤(pán)子倒置，用干凈的紙巾吸干。
向每個(gè)孔中加入100 μl檢測(cè)試劑B工作溶液。用新的板密封劑覆蓋。在37℃下孵育1小時(shí)。
重復(fù)步驟4中的抽吸/清洗。
向每個(gè)孔中加入90 μl底物溶液。用新的板密封劑覆蓋。在37℃下孵育15-30分鐘。避光。
向每個(gè)孔中加入50 μl終止液。如果顏色變化不均勻，輕敲平板以確保充分混合。
使用設(shè)置為450納米的酶標(biāo)儀，一次測(cè)定每個(gè)孔的光密度。

注意:

吸光度是孵育時(shí)間的函數(shù)。因此，在開(kāi)始分析前，建議所有試劑在使用前應(yīng)新鮮制備，并且所有需要的條形孔都固定在微量滴定框架中。這將確保每個(gè)移液步驟花費(fèi)的時(shí)間相等，不會(huì)中斷。
請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明小心地重新配制標(biāo)準(zhǔn)品或工作檢測(cè)試劑A和B，避免起泡并輕輕混合，直到晶體溶解。復(fù)溶的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)試劑A和B只能使用一次。這種分析需要少量的移液。為了最大限度地降低移液造成的不精確性，請(qǐng)確保移液器經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)。建議一次移液吸取10μl以上。
為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在培養(yǎng)步驟中，板密封器的適當(dāng)粘附是必要的。在孵育步驟之間，不要讓孔長(zhǎng)時(shí)間無(wú)蓋放置。一旦將試劑添加到孔板條中，在檢測(cè)過(guò)程中的任何時(shí)候都不要讓孔板條變干。
對(duì)于程序中的每個(gè)步驟，向檢測(cè)板添加試劑的總分配時(shí)間不應(yīng)超過(guò)10分鐘。
為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谔砑用總€(gè)標(biāo)準(zhǔn)水平、添加樣品和添加試劑之間更換移液器吸頭。此外，每種試劑使用單獨(dú)的容器。
清洗程序至關(guān)重要。清洗不充分會(huì)導(dǎo)致精度下降和吸光度讀數(shù)錯(cuò)誤升高。
盡管不要求，但建議復(fù)制所有標(biāo)準(zhǔn)和樣本。
底物溶液容易被污染。請(qǐng)避光保存。


特征：該分析識(shí)別重組和天然人1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1。沒(méi)有觀察到明顯的交叉反應(yīng)或干擾。

注意:限于目前的技術(shù)和知識(shí)，我們不可能完成人與所有類(lèi)似物之間的交叉反應(yīng)檢測(cè)，因此，交叉反應(yīng)可能仍然存在。

探測(cè)距離：3.12-200納克/毫升。

統(tǒng)計(jì)

平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品的重復(fù)讀數(shù)，并減去平均零標(biāo)準(zhǔn)光密度。使用能夠生成四參數(shù)邏輯(4-PL)曲線(xiàn)擬合的計(jì)算機(jī)軟件，通過(guò)減少數(shù)據(jù)來(lái)創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)?；蛘撸ㄟ^(guò)在x軸上繪制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度與y軸上的濃度來(lái)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并通過(guò)圖上的點(diǎn)繪制最佳擬合曲線(xiàn)。數(shù)據(jù)可以通過(guò)繪制1-磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸磷酸二酯酶γ-1濃度的對(duì)數(shù)對(duì)O.D .的對(duì)數(shù)來(lái)線(xiàn)性化，并且最佳擬合線(xiàn)可以通過(guò)回歸分析來(lái)確定。建議用一些相關(guān)的軟件來(lái)做這個(gè)計(jì)算，比如曲線(xiàn)專(zhuān)家1.3。這個(gè)過(guò)程將產(chǎn)生一個(gè)適當(dāng)?shù)牡惶_的數(shù)據(jù)擬合。如果樣品已經(jīng)稀釋?zhuān)瑥臉?biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)讀取的濃度必須乘以稀釋系數(shù)。

重要提示:

受目前條件和科學(xué)技術(shù)的限制，我們無(wú)法對(duì)供應(yīng)商提供的原材料進(jìn)行全面的鑒定和分析。因此，使用該試劑盒可能存在一些定性和技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)
最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果將與產(chǎn)品的有效性、最終用戶(hù)的操作技能和實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。請(qǐng)確保有足夠的樣品。
不同批次的試劑盒在檢測(cè)范圍、靈敏度和顯色時(shí)間上可能略有不同。請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒中的說(shuō)明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而我們網(wǎng)站上的電子說(shuō)明僅供參考。
第一次打開(kāi)板時(shí)，孔中可能有一些模糊的物質(zhì)。它不會(huì)對(duì)最終檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生任何影響。
除非需要，否則不要從儲(chǔ)存袋中取出微量滴定板。
帶寬為10納米或更小、在450納米波長(zhǎng)下光密度范圍為0-3 OD或更大的微量滴定板讀數(shù)器可用于吸光度測(cè)量。
每次轉(zhuǎn)移時(shí)使用新的一次性移液器吸頭，以避免污染。
請(qǐng)勿將試劑從一個(gè)試劑盒批次替換到另一個(gè)試劑盒批次。僅使用制造商提供的試劑。
即使是同一個(gè)操作員在兩個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)中也可能得到不同的結(jié)果。為了獲得更好的重現(xiàn)性結(jié)果，應(yīng)控制檢測(cè)中每一步的操作。此外，建議在對(duì)每批產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)前進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)。
每個(gè)套件都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制測(cè)試。然而，由于一些意外的運(yùn)輸條件或不同的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，最終用戶(hù)的結(jié)果可能與我們的內(nèi)部數(shù)據(jù)不一致。來(lái)自不同批次的試劑盒之間的測(cè)定內(nèi)差異也可能由上述因素引起。
不同制造商生產(chǎn)的同一產(chǎn)品的試劑盒可能會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果，因?yàn)槲覀儧](méi)有將我們的產(chǎn)品與其他制造商的產(chǎn)品進(jìn)行比較。
有效期:六個(gè)月。

預(yù)防

建議與該試劑盒一起使用的終止溶液是酸性溶液。使用這種材料時(shí)，戴上眼睛、手、臉和衣服防護(hù)裝置。

典型數(shù)據(jù)

此圖表數(shù)據(jù)作為示例顯示。每次運(yùn)行檢測(cè)時(shí)，必須生成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

AOBIOUS是一家小型但發(fā)展迅速的公司，為全球研究市場(chǎng)提供新的生物活性藥物樣小分子。自2014年以來(lái)，我們是該市場(chǎng)上在定價(jià)方面提供按需定量(QOD)服務(wù)的公司。我們也是自2016年以來(lái)提供MolCart(摩爾濃度計(jì)算車(chē))訂購(gòu)產(chǎn)品的公司。客戶(hù)可以選擇使用QOD/摩爾卡購(gòu)買(mǎi)任何數(shù)量或摩爾濃度的產(chǎn)品。

一般儲(chǔ)存條件
在沒(méi)有任何附加說(shuō)明的情況下，我們所有的產(chǎn)品都應(yīng)在4攝氏度的冰箱中短期儲(chǔ)存2-6個(gè)月。

我們不建議客戶(hù)將我們的產(chǎn)品長(zhǎng)期存放在他們自己的地方，因?yàn)樗麄兛梢噪S時(shí)從我們這里訂購(gòu)他們需要的確切數(shù)量。

上海牧榮生物科技有限公司 是一家專(zhuān)注于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域，以銷(xiāo)售為主的生物技術(shù)公司。銷(xiāo)售的產(chǎn)品涉及，細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備等。Aobious 銷(xiāo)售

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