珠磨均質(zhì)機

超過40%的實驗室勻漿器專門用于破碎細(xì)胞。在實驗室均質(zhì)器的一般類別中，珠磨，通常稱為串珠，是這一大類中的最新產(chǎn)品，是傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)子-定子和超聲波方法成為細(xì)胞和組織破碎的方法。

在珠磨過程中，將組織或微生物的懸浮液與大量微小的玻璃、陶瓷或鋼珠混合，并通過搖動或攪拌進(jìn)行劇烈攪拌。當(dāng)珠子與細(xì)胞碰撞時，通過珠子的壓碎作用發(fā)生細(xì)胞破裂。與超聲波和高壓細(xì)胞破碎方法相比，珠磨法的剪切力相對較低。通過選擇正確大小的珠子和適度的搖動速度，細(xì)胞膜的回收率很高，并且通?？梢苑蛛x出完整的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器。在較高的振蕩能量下，beadbeating被認(rèn)為是破碎孢子、酵母和真菌的方法，并成功地應(yīng)用于難以破碎的細(xì)胞，如藍(lán)細(xì)菌、分枝桿菌、孢子和微藻。最近，珠磨機均化已應(yīng)用于土壤樣品和植物及動物組織的小樣品。如果采用PCR技術(shù)，這種均質(zhì)化方法是少數(shù)幾種可以避免樣品之間交叉污染的方法之一-主要是因為該方法中使用的小瓶和珠子都是一次性物品。

所用珠子的直徑很重要。細(xì)菌和孢子的最佳尺寸為0.1毫米，酵母、菌絲體、微藻和單細(xì)胞動物細(xì)胞如白細(xì)胞或胰蛋白酶組織培養(yǎng)細(xì)胞的最佳尺寸為0.5毫米，組織如腦、肌肉、葉子和皮膚的最佳尺寸為1.0或2.5毫米。通過使用由氧化鋯-二氧化硅或氧化鋯而不是玻璃制成的類似尺寸但更重的陶瓷珠，破碎速度提高了約50%。破壞真正堅韌的組織有時需要鉻鋼珠——其密度是玻璃珠的5倍。

雖然微型閥中的鋼珠可用于“搖動式珠磨機"，但它們太重而無法用于“轉(zhuǎn)子式珠磨機"。即便如此，在一些高能振動式珠磨機中，鋼珠可能會使常見的聚丙烯微孔破裂。為了避免這種微孔限制，俄克拉荷馬州巴特爾斯維爾的BioSpec Products公司提供了強化聚丙烯微孔（品牌為“XXTuff"）或不銹鋼微孔。有報道稱，由碳化硅或石榴石制成的邊緣鋒利的非珠狀顆粒也能很好地破壞堅韌的組織。小瓶中足夠的珠裝量通常約為小瓶總體積的20-50%。并且，在轉(zhuǎn)子型壓條攪拌器的情況下，相對于腔室容積的壓條裝載容積約為50%。通常，珠子與細(xì)胞懸浮液的體積比越高，細(xì)胞破碎的速度越快。在珠磨機中均化后，珠子通過重力快速沉降，并通過移液移除勻漿。

可以使用珠磨技術(shù)手動破碎微生物和組織:雖然這種手持方法繁瑣而緩慢，但它可以作為珠磨法的初步測試:將懸浮在1mL提取介質(zhì)中的微生物細(xì)胞或組織（預(yù)先切碎成非常小的碎片）添加到預(yù)先裝有1mL適當(dāng)大小珠子的2 mL微孔中。蓋上微孔蓋，在實驗室渦旋混合器上攪拌混合物十分鐘。

搖動式珠磨機

標(biāo)準(zhǔn)搖動式珠磨機（又名Beadbeater）可使用2 mL聚丙烯螺旋蓋微量量具處理高達(dá)500 mg（濕重）的樣品。還提供可容納7 mL或更大試管的珠磨機附件。必須始終使用螺旋蓋，因為在高能搖動過程中，彈簧蓋微孔會釋放出內(nèi)含物的氣溶膠。這些珠磨機將小瓶保持在垂直位置或更有效的接近水平的位置。幾乎所有的機器都沿著小瓶的軸線方向搖動珠子，小瓶前后搖動的模式可以是線性的，也可以是壓縮的8字形。雖然不同品牌的珠磨機之間存在一些明顯的性能差異，尤其是在破碎堅韌的細(xì)胞或組織時，全破碎通常需要大約1-3分鐘，并且細(xì)胞內(nèi)生化物質(zhì)的產(chǎn)量非常高。打珠后，珠子在重力作用下在幾秒鐘內(nèi)沉淀下來，細(xì)胞提取物很容易用移液管移出。

1979年，BioSpec Products推出實驗室規(guī)模的珠磨細(xì)胞粉碎機，并在市場上占據(jù)了大約20年的時間。該公司現(xiàn)在生產(chǎn)六種型號的高能實驗室級珠磨機。mini beater-Plus可容納一個2 mL螺旋蓋微量比色皿，而其他三個mini beater型號一次可處理多達(dá)16、24或48個2mL微量比色皿。mini beater-96還可以處理96個深孔微孔板中的樣品。他們還提供了一個可處理高達(dá)80克（濕重）微生物細(xì)胞的制備型實驗室攪拌機。他們的最新產(chǎn)品SoniBeast可處理12個0.6毫升微管或3個2毫升微量管，與搖動式珠子攪拌器不同的是，它使用超高渦流運動攪拌珠子，該運動由30，000 rpm（500Hz）的電機驅(qū)動。SoniBeast在幾秒鐘內(nèi)而不是幾分鐘內(nèi)破碎細(xì)胞，使其成為市場上最快的珠磨細(xì)胞破碎機。

轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機（也稱為膠體磨或Willems均質(zhì)機）

這些均質(zhì)器非常適合在1毫升到幾升的液體介質(zhì)中均質(zhì)植物和動物組織。它們通常優(yōu)于刀片式折彎機。與攪拌機相比，起泡和充氣現(xiàn)象最少，并且易于容納小得多的樣品體積。細(xì)胞物質(zhì)通過位于長靜態(tài)管或探針（通常稱為定子）末端內(nèi)部的轉(zhuǎn)子產(chǎn)生的吸力被吸入設(shè)備。然后，材料通過位于定子附近的槽或孔離心排出。組織被反復(fù)回收，并且由于轉(zhuǎn)子以非常高的速度轉(zhuǎn)動，在液體剪切力和發(fā)生在探針的機械剪刀狀剪切的共同作用下，組織的尺寸減小。根據(jù)組織樣本的韌性，通常在5-60秒內(nèi)獲得所需的結(jié)果。對于細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器或受體位點復(fù)合物的回收，使用較短的時間和/或降低的轉(zhuǎn)子速度。當(dāng)使用較小尺寸的轉(zhuǎn)子-定子探頭時，在處理前必須用手術(shù)刀或剃刀片將組織樣本預(yù)先切成橫截面小于1 mm的碎片，以便將樣本吸入定子的孔內(nèi)。如果樣本已經(jīng)冷凍保存，可以使用低溫粉碎器（一種在液氮溫度下快速粉碎組織的設(shè)備-見下文）在不解凍的情況下將組織樣本破碎成小塊。一些轉(zhuǎn)子-定子制造商提供的探頭在定子頂端有一圈鋸齒狀的齒，這有助于破碎最初太大而無法進(jìn)入探頭的樣品。該功能很有幫助，但同質(zhì)化時間可能會更長。與許多其他類型的機械細(xì)胞破裂機不同，轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機在運行過程中基本不產(chǎn)生熱量此外，轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機不能溶解微生物-這一特性在研究土壤、糞便等中的微生物時很有用。

大多數(shù)實驗室轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機都是頂部驅(qū)動的，帶有一個轉(zhuǎn)速為8，000至35，000 rpm的緊湊型高速電機。轉(zhuǎn)子-定子探針（統(tǒng)稱為發(fā)生器）的尺寸可以從用于0.5-50毫升樣品體積的吸管直徑到能夠處理10升或更多批次的更大裝置不等。轉(zhuǎn)子速度和定子直徑之間存在重要關(guān)系。原則上，轉(zhuǎn)子直徑每減半，均質(zhì)機的最高轉(zhuǎn)子速度應(yīng)加倍。它不是rpm就其本身而言，但是轉(zhuǎn)子的速度是重要的操作參數(shù)。每秒10至20米（2000至4000英尺/分鐘）是組織破碎可接受的速度。不幸的是，大多數(shù)小到足以輕松裝入微管的商用轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機都達(dá)不到這一速度標(biāo)準(zhǔn)。在選擇轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機時，其他因素如轉(zhuǎn)子-定子設(shè)計（有很多）、結(jié)構(gòu)中使用的材料以及清潔的難易程度也是需要考慮的重要因素。

實驗室尺寸的均質(zhì)器僅適用于中低粘度范圍的液體樣品。由于使用太小的裝置，均化的速度和效率受到影響，并且給定均化器的轉(zhuǎn)子-定子探針尺寸有效工作的體積范圍只有大約十倍。轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機可能會出現(xiàn)泡沫和氣溶膠問題。保持均質(zhì)機的一端浸沒在培養(yǎng)基中，并使用大小合適的容器有助于解決第一個問題。方形均化容器比圓形容器效果更好，并且有利于將浸沒的探針保持在偏心位置。通過使用適當(dāng)覆蓋的容器（VirTis、Brinkmann和Omni），可以最大限度地減少氣溶膠，但不能消除氣溶膠。盡管許多實驗室轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機使用全封閉電機，但沒有一臺電機是防爆的。因此，使用易燃有機溶劑（如丙酮、酒精或氯仿）時，應(yīng)小心謹(jǐn)慎，在通風(fēng)良好的通風(fēng)柜中進(jìn)行均化。

底部驅(qū)動實驗室轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機是實驗室的新成員。轉(zhuǎn)子-定子組件通常放置在密封的腔室或容器內(nèi)，適合攪拌機電機底座，工作容積為100-1000毫升。

分散器  

與轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)器密切相關(guān)，分散器用于制備大量植物和動物水提物。轉(zhuǎn)子-定子機構(gòu)的構(gòu)造類似于家庭垃圾處理裝置，可快速均勻化和液化千克數(shù)量的生物質(zhì)。樣品懸浮在一升或多升介質(zhì)中，裝入頂部容器中，以連續(xù)或分批模式均質(zhì)化。

葉片式均質(zhì)機

盡管效率不如轉(zhuǎn)子-定子均質(zhì)機，并且通氣和起泡可能是一個問題，但葉片均質(zhì)機（通常稱為攪拌機）多年來一直用于從植物和動物組織中生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)布里干酪和提取物。攪拌機不能有效地破壞微生物。在這類均質(zhì)機中，一組不銹鋼刀片在玻璃、塑料或不銹鋼容器內(nèi)以6000-50000 rpm的速度旋轉(zhuǎn)。葉片可以是底部驅(qū)動的，也可以是頂部驅(qū)動的。如流式細(xì)胞儀分析所確定的，一些高速勻漿器可以將組織樣品減小到一致的顆粒大小，其分布小至4微米?；旌虾?，一些植物組織勻漿會發(fā)生酶促褐變-這是一種氧化和化學(xué)交聯(lián)過程，會使隨后的分離過程變得復(fù)雜。通過在無氧或除氧硫醇化合物如巰基乙醇存在下進(jìn)行提取，酶促褐變被最小化。聚乙烯亞胺、金屬螯合劑或某些溫和洗滌劑（如Triton X-100或Tween 80）的添加也將酶促褐變降低。

使用攪拌機時，與酒精或丙酮等易燃溶劑混合時要小心。攪拌機使用有刷電機來實現(xiàn)高速運轉(zhuǎn)，因此在運轉(zhuǎn)過程中會產(chǎn)生火花。此外，混合時容易形成氣溶膠。勻漿病變組織時，使用密封的攪拌器容器，并在通風(fēng)良好的安全罩中操作。

冷凍斷裂或冷凍硬化

微生物糊和動植物組織可以在液氮中冷凍，然后在同樣的低溫下用研缽和杵研磨。堅硬的冷凍細(xì)胞因其易碎性而破裂。此外，在如此低的溫度下，內(nèi)部冰晶可能會產(chǎn)生磨損。這一過程的最終產(chǎn)物可以是鹽粒大小的極小組織塊，也可以是幾乎所有細(xì)胞都被破壞的制劑。關(guān)于后者，低溫冷凍是一種機械細(xì)胞破碎方法，能夠遞送非常高分子量的DNA。

杵和管勻漿器（也稱為組織研磨機）

用來破壞新鮮的動物組織。盡管研杵和試管均質(zhì)器的變體有諸如波特、波特-埃爾維耶姆、唐斯和Ten Broeck之類的名稱，但作為一個整體，它們由玻璃、惰性塑料或不銹鋼制成的試管組成，其中插入了由類似材料制成的緊密配合的研杵，間隙約為0.1-0.2毫米。試管和研杵的壁可以是光滑的或經(jīng)過研磨的。大多數(shù)組織必須用剪刀或單刃刀片切割或剁碎成小塊（橫截面約1毫米），然后懸浮在試管中3-10倍體積的培養(yǎng)基中。杵被手動操作到管的底部，從而當(dāng)組織被迫在杵的緊密配合側(cè)和管壁之間流動時撕裂和壓碎組織。當(dāng)杵縮回時，研磨動作再次發(fā)生。這種低剪切方法需要重復(fù)五到三十次才能使大多數(shù)組織均質(zhì)化。當(dāng)試管被手動升高和降低時，通過連接到電動機的研杵以大約500-1000 rpm的速度旋轉(zhuǎn)來加速該過程。雖然杵和管均質(zhì)很簡單，使用的設(shè)備通常也不貴，但該過程是勞動密集型的，并且當(dāng)使用易碎的玻璃均質(zhì)器時，存在潛在的危險。即便如此，這種均質(zhì)機仍因其極其溫和的作用而繼續(xù)受到歡迎。這通常是從腦或肝等動物軟組織中制備少量亞細(xì)胞器的方法。微生物不能用杵式均質(zhì)機破碎。

固體組織壓榨機和分散機

有幾種機械裝置通過迫使固體組織樣本穿過一系列小孔或不銹鋼篩網(wǎng)來將軟組織縮小到更小的尺寸。在大多數(shù)情況下，在均質(zhì)化之前沒有向樣品中加入液體介質(zhì)，并且根據(jù)所用的壓機，排出的分散組織可以具有從漢堡肉到糊狀肝醬的不同質(zhì)地。雖然這不是破壞細(xì)胞的有效方法本身時，它被用作使用其他物理、化學(xué)或酶方法進(jìn)行均質(zhì)化的預(yù)備步驟。

家用絞肉機或絞肉機已經(jīng)用于制備分散的動物組織幾十年了。組織被機械地推過金屬篩板上的小孔，同時旋轉(zhuǎn)的刀片慢慢掃過篩板的表面，并將擠出的肉切成0.3 - 0.5毫米的碎片。如果組織稍微冷凍處理，絞肉機可以更好地切割肌肉等柔性組織。

超聲波粉碎機

這些設(shè)備在液體介質(zhì)中產(chǎn)生強烈的聲波壓力波，并廣泛用于破壞細(xì)胞。在適當(dāng)?shù)臈l件下，高壓波會在超聲波探頭表面附近形成短暫的微泡，這些微泡會劇烈生長和破裂。內(nèi)爆產(chǎn)生的沖擊波被稱為空化，其能量足以撕裂細(xì)胞膜，甚至可以破壞共價鍵。

現(xiàn)代超聲波處理器使用由鋯鈦酸鉛晶體制成的壓電發(fā)生器。振動通過鈦金屬喇叭或探針傳遞，該喇叭或探針被調(diào)整為使處理器單元以15-25 kHz的頻率共振。超聲波處理器的額定功率輸出從10瓦到375瓦不等。真正重要的是探針的功率密度。正如預(yù)期的那樣，需要更高的輸出功率來維持大尺寸探頭的良好性能。對于細(xì)胞破碎，探針密度應(yīng)至少為100 W/cm2，并且振動幅度越大越好（典型范圍:30-250微米）。