肽標記策略
標記肽可以通過修飾分離的肽或在固相合成過程中結(jié)合標記來制備。用熒光團標記肽的常用策略包括:
肽合成過程中的標記-可以耐受解封閉程序的染料可以結(jié)合到肽鏈的氨基末端。
2.N端修飾:N端是指蛋白質(zhì)或多肽鏈起始處的游離胺基(-NH2)??梢允褂冒贩磻早牾啺孵晒鈭F對其進行共翻譯修飾或翻譯后修飾。
3.賴氨酸殘基:賴氨酸殘基的ε-氨基可以用胺反應性琥珀酰亞胺酯熒光團修飾。
4.C端修飾:C端是指蛋白質(zhì)或多肽鏈末端的羧基(-COOH)。它可以在翻譯后進行修飾,通常是在C端酰胺化之后。
5.如果肽鏈上有半胱氨酸,巰基反應蛋白標記可以共價標記合成肽。
6.非天然氨基酸可以在合成過程中結(jié)合到肽鏈中,然后通過生物正交反應(例如基于疊氮化物和炔烴的反應以及酮醛反應)用染料或其他探針標記。